限制酶切割位点讲解（如何让你的酶切反应“时半功倍”？）
100次浏览 发布时间：2024-09-08 08:05:07
限制性核酸内切酶(以下简称限制性酶)是一类识别双链DNA中特定核苷酸序列的DNA水解酶，以内切方式水解DNA，产生5’-P和3’-OH末端。限制性酶主要分为三种类型：Ⅰ型限制酶为复合功能酶，具有限制-修饰两种功能，但在 DNA链上没有固定的切割位点，一般在离切割位点1kb到几kb的地方随机切割，不产生特异性片段。Ⅲ型酶与Ⅰ型酶基本相似，不同的是Ⅲ型酶有特异性的切割位点，但这两类酶对 DNA酶切分析的意义不大，通常所说的限制性内切酶是指Ⅱ型酶，它能够识别与切割DNA链上的特定的核苷酸顺序，产生特异性的DNA片段。
限制性酶切看似简单，但其实暗藏玄机。如果单单按照protocol上面操作，结果往往是不理想的。那么今天小编就会给你介绍一下酶切实验操作过程中需要注意的几个方面，哪怕是小细节，也至关重要。
1、记得加牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin, BSA），达到稳定限制性酶的效果，并且减少内切酶粘附试管壁的情况。传统的方法是单独购买BSA溶液，现在越来越多的缓冲液例如Tango Buffer或是Mastermix都含有BSA，从而使酶切实验更为简便。
2、如果限制性酶的反应效率在含盐缓冲液中(e.g., NEBuffer 3.1) 很低，说明很有可能这种酶对盐量敏感。在DNA 的制备过程中，要尽量清除掉溶液中的盐分。
3、限制性酶的总体积要少于总反应液体积的10%。用于保存酶的甘油如果过多，会抑制酶切反应，大大降低酶切的效率。
4、在保证第3条的前提下，加尽可能多的限制性酶来提升反应效率。这里要强调下一单位（1U）的定义，一单位酶可以在一小时内标准反应条件下酶切1 µg的DNA。如果担心甘油会抑制酶切，可以考虑购买单位浓度比较高的限制性酶。每一个生产商都会标明浓度单位，例如10U/µL。
5、进行无酶切、单酶切测试。不管是什么实验，都要有对照实验来证明结果的有效性。不加入任何限制性酶，或是加入单一酶都可以很好的验证限制性酶的效率并且分辨出假阳性实验结果。
6、查看限制性酶的反应效率表和相对应的保护碱基。限制性酶除了识别特定的DNA序列外，酶蛋白还要占据识别位点两边的若干个碱基，这些碱基对内切酶稳定的结合到DNA双链并发挥切割DNA作用是有很大影响的。每一个酶的工作效率和保护碱基的长短不尽相同，要根据个人使用的酶的特点来设计实验才能达到理想的效果。
-
-
再等不到：结局+番外+完本（夏月彤祁景泽）最新章节_再等不到：结局+番外+完本全文阅读
虐心《再等不到：结局+番外+完本》是以夏月彤祁景泽作为主角，大胆的构思也让人眼前一亮！主要内容简介：周末休息了两天，周一，夏月彤准时去了公司。她像往常那样处理手头的工作，通知祁景泽马上有个会议。走到办公室，她隔着虚掩的门缝，就看到了许青瑶。她坐在祁景泽怀里，将自己吃了一半的饼干喂给他。素来有洁癖的男
2025-04-22 16:52:00
-
-
全本你都如何回忆我笔趣阁（温妤霍闻深）最新章节列表_全本你都如何回忆我笔趣阁全文阅读
《你都如何回忆我笔趣阁》免费阅读！这本书是温妤创作的一本言情，主要讲温妤霍闻深的故事。讲述了： 温妤的后背布满了触目惊心的伤痕，除了新鲜的鞭痕，还有各种陈旧的伤疤，交错纵横，像是被无数次的折磨刻印在她的皮肤上。整个身体看上去已经没有一块完好的地方，仿佛每一寸肌肤都在诉说着她曾经遭受的痛苦。霍闻深..
2025-04-22 16:35:00
-
-
全球最薄白瓷杯亮相厦门
近日，在厦门国际会展中心的世界纪录认证（WRCA）官方展览厅内，由福建省工艺美术大师陈清宜所制的全球最薄白瓷杯惊艳亮相。当天，陈清宜白瓷艺术展在此开幕。作为展览的重磅展品，这件白瓷杯的杯壁仅有0.5mm 之薄，却凝聚了陈清宜多年的心血。出生于瓷都德化的陈清宜，从小就深受家乡陶瓷文化的熏陶。2019
2025-04-22 16:34:00
-
-
顾加广，被查
盐城市供销合作总社党委委员、理事会副主任顾加广涉嫌严重违纪违法，目前正接受盐城市纪委监委纪律审查和监察调查。来源：盐城镜鉴
2025-04-22 16:19:00
-
-
唐雨黛肖越卓（抱紧我，放弃我唐雨黛肖越卓：结局+番外）全文阅读无弹窗结局_(唐雨黛肖越卓抱紧我，放弃我唐雨黛肖越卓：结局+番外阅读全文结局)结局章节列表_笔趣阁（唐雨黛肖越卓）
主人公叫唐雨黛的小说叫做《抱紧我，放弃我：+番外+后续》主要刻画唐雨黛肖越卓的故事。小说精彩片段：在这里的？”唐雨黛无奈：“你又逃走。”徐顺生撇了撇嘴徐顺生猛地从石墙上冒出个脑袋来，他笑着眯起眼睛。“你怎么知道我在这里的？”唐雨黛无奈：“你又逃走。”徐顺生撇了撇嘴，他往嘴里叼了一根草：“化疗很疼的，
2025-04-22 16:06:00